Ультрафильтрлау центрифуга трубасын куллану һәм саклык чаралары
1) Уңайлы ультрафильтрлау трубасын сайлагыз.Игътибар итегез, UF мембраналары төрле химик матдәләргә толерантлык дәрәҗәсендә аерылып торалар.Гадәттә, 10 кДа молекуляр авырлык белән киселгән ультрафильтр трубалары молекуляр авырлык белән киселергә мөмкин, бу кызыклы протеинның молекуляр авырлыгының 1/3 өлешеннән артмаска тиеш, мәсәлән, 35 kDa.Әгәр дә кызыксыну протеинының молекуляр авырлыгы 10 кд тирәсе булса, 3 КД молекуляр авырлыгы киселгән ультрафильтрлау трубасы кулланылырга мөмкин.
2.Аннары су коела, ягъни протеин сыеклыгы, һәм күпме өстәлә, кайсысы труба өстендәге ак сызыктан артмый.Операция җиңел, һәм ультрафильтрлау трубасы протеин эремәсен кушканчы боз өстендә алдан ясалырга тиеш.
3) Масса да, тарту үзәге дә баланска ирешергә тиеш иде.Игътибар итегез, әйләнү тизлеге һәм тизләнеше бик тиз түгел, югыйсә ультрафильтрлау мембранасына турыдан-туры зыян китерә.Centентрифугаль ультрафильтрлау башланды (центрифуга 4 градуска кадәр).Төрле центрифугларның РПМы g га үзгәртелгәннән соң, ул бүтән иде.Centентрифуга тизләнеше минимумга көйләнде, мембранага басымны киметте.Игътибар итегез, центрифуга билгеләнгән тизлеккә җиткәч, центрифуга калдырыгыз, яисә проблемагыз булса, сез аны беренче тапкыр эшли алмыйсыз.Мембрананың шакмакка юнәлеше күрсәтмәләр буенча көйләнде (почмак центрифуга корпусы перпендикуляр күчәренә мембрана).Практик куллануда, центрифуга трубасының гомере озайтылсын өчен, гомуми әйләнү тизлеге күрсәтмәләрдәгедән түбән.
3) Масса да, тарту үзәге дә баланска ирешергә тиеш иде.Игътибар итегез, әйләнү тизлеге һәм тизләнеше бик тиз түгел, югыйсә ультрафильтрлау мембранасына турыдан-туры зыян китерә.Centентрифугаль ультрафильтрлау башланды (центрифуга 4 градуска кадәр).Төрле центрифугларның РПМы g га үзгәртелгәннән соң, ул бүтән иде.Centентрифуга тизләнеше минимумга көйләнде, мембранага басымны киметте.Игътибар итегез, центрифуга билгеләнгән тизлеккә җиткәч, центрифуга калдырыгыз, яисә проблемагыз булса, сез аны беренче тапкыр эшли алмыйсыз.Мембрананың шакмакка юнәлеше күрсәтмәләр буенча көйләнде (почмак центрифуга корпусы перпендикуляр күчәренә мембрана).Практик куллануда, центрифуга трубасының гомере озайтылсын өчен, гомуми әйләнү тизлеге күрсәтмәләрдәгедән түбән.
.Әгәр дә труба агып чыкса, ультрафильтрлау башлау өчен өске катламны һәм агымны яңа трубкага салыгыз.Трубалар сагынылганмы-юкмы икәнен ачыклау өчен, центрифуга 10 минутка 5мгмл BSA белән агымга кадәр, протеин клейында яки Брэдфорд чималында эшләп, калган концентрацияләнгән протеин эремәсен кушып дәвам итегез (ул боз өстендә эшли һәм аксымнарны җылытырга комачаулый). барлык концентрат өстәлде.Белгечләр явым-төшем булса, центрифугация вакытында сак булыгыз, труба ябылуга китерә.Әгәр явым-төшем килеп чыкса, явым-төшемнең конкрет сәбәбе - протеинның артык концентрациясе яки урынсыз буфермы-юкмы икәнен ачыклагыз;Беренчесен берьюлы берничә ультрафильтр трубасының ультрафильтрлау белән чишеп була, концентрацияне киметә, соңгысы төрле буфер эремәләрен алмаштырып, протеин явым-төшеме булмаганчы чишелә ала.
.Әгәр дә труба агып чыкса, ультрафильтрлау башлау өчен өске катламны һәм агымны яңа трубкага салыгыз.Трубалар сагынылганмы-юкмы икәнен ачыклау өчен, центрифуга 10 минутка 5мгмл BSA белән агымга кадәр, протеин клейында яки Брэдфорд чималында эшләп, калган концентрацияләнгән протеин эремәсен кушып дәвам итегез (ул боз өстендә эшли һәм аксымнарны җылытырга комачаулый). барлык концентрат өстәлде.Белгечләр явым-төшем булса, центрифугация вакытында сак булыгыз, труба ябылуга китерә.Әгәр явым-төшем килеп чыкса, явым-төшемнең конкрет сәбәбе - протеинның артык концентрациясе яки урынсыз буфермы-юкмы икәнен ачыклагыз;Беренчесен берьюлы берничә ультрафильтр трубасының ультрафильтрлау белән чишеп була, концентрацияне киметә, соңгысы төрле буфер эремәләрен алмаштырып, протеин явым-төшеме булмаганчы чишелә ала.
(5) Протеинны туплау өчен беренче берничә адым кулланыла, һәм буфер үзгәртелергә тиеш булса, яңа буферны (0,22ум ультрафильтрлау мембранасы аша) 1мл гомуми протеинга кушыгыз, һәм өч өчен 1млга кадәр концентрацияләнегез. эзлекле протеин концентрациясенә карап, соңгы концентрацияләнгән соңгы күләм белән, гадәттә 500улдан артмый, шулай ук 200ул эчендә.Өч очракта 1000 × яки аннан да күбрәккә ирешегез, нигездә буфер үзгәреше, ким дигәндә 10 × яисә күләмне баету белән исәпләнгәнчә.
(5) Протеинны туплау өчен беренче берничә адым кулланыла, һәм буфер үзгәртелергә тиеш булса, яңа буферны (0,22ум ультрафильтрлау мембранасы аша) 1мл гомуми протеинга кушыгыз, һәм өч өчен 1млга кадәр концентрацияләнегез. эзлекле протеин концентрациясенә карап, соңгы концентрацияләнгән соңгы күләм белән, гадәттә 500улдан артмый, шулай ук 200ул эчендә.Өч очракта 1000 × яки аннан да күбрәккә ирешегез, нигездә буфер үзгәреше, ким дигәндә 10 × яисә күләмне баету белән исәпләнгәнчә.
Пост вакыты: Ноябрь-09-2022